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血清采集与检测 -- www.immuexp.com中国免疫学实验网
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基础免疫学实验，尽在中国免疫学实验网 http:/ www.immuexp.com. 效价检测的方法主要有两种， 一种是琼脂扩散实验，另一种是间接ELISA 酶联免疫吸附测定 ，关于ELISA的原理和方法可以参见本站相关页面的讲解 点击这里查看间接法ELISA. 操作流程 1 用PBS将琼脂粉稀释至1%，水浴加热融化，稍稍冷却，将其倒入模具 没有模具弄个瓶盖也行 ，冷却成型。 用ELISA检测效价在1 10000以上 cufoff值为1.0 ，或者琼脂扩散在1:16以上时可以进行血清采集工作了。
单抗制备技术近十年来进展 -- www.immuexp.com中国免疫学实验网
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基础免疫学实验，尽在中国免疫学实验网 http:/ www.immuexp.com. 最常用的基本上就是KLH, BSA,OVA和GST， 但是觉得近几年以来，用多肽复合抗原肽 MAP 的比较多。 从获取方式来看，对于蛋白质类抗原，不仅可以重组表达 原核和真核 ， 还可以直接从天然组织或细胞中分离。 但是最近20年以来，基本上都用重组蛋白了，重组蛋白生产技术非常成熟，而且生产也简单，容易扩大规模，但是慢慢地很多人意识到重组蛋白和天然的蛋白在结构上有时候有着极大的差异，所以不少人认为确实是天然蛋白免疫得到的抗体是最好的，有兴趣可以看看这篇文章 Generation and Characterization of a Panel of Monoclonal Antibodies Against Distinct Epitopes of Human CD146，一个典型的从天然组织中纯化出蛋白作为抗原制备单抗的例子。 大家可以看这篇文献 Rapid development of affinity matured monoclonal antibodies using RIMMS和这篇 Shorter deve...
单抗制备克隆筛选 -- www.immuexp.com中国免疫学实验网
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基础免疫学实验，尽在中国免疫学实验网 http:/ www.immuexp.com. 目前主要有这么几种方法 1 间接血凝实验 IHA。 2 免疫荧光 IF 或免疫细胞化学 ICC 或免疫组织化学 IHC。 倒掉抗原，拍干酶标板孔内液体，以0.5-1% BSA 用PBST溶解 或5% 脱脂牛奶 PBST溶解 或1% 明胶 PBST溶解 于37 封闭2h或4 封闭过夜，也可以使用10%小牛血清或其它无关物种血清封闭。 这一部份讲解比较简单，详细的讲解可以看看ELISA栏目下的讲解，大家可以根据自己的实际需要设计不同的筛选方法，也可以尝试使用新型快速筛选手段 如蛋白质芯片、荧光激活细胞分离技术等 ，希望了解其它筛选手段的朋友可以在本站论坛上发帖交流 需要文献的也可以论坛提出，站长将陆续上传资料 ，也可以加入中国免疫学实验网QQ群和大家及时联系 42654080。
单抗制备概述 -- www.immuexp.com中国免疫学实验网
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基础免疫学实验，尽在中国免疫学实验网 http:/ www.immuexp.com. 1975年，Georges J. F. Kölhler 德国 和 César Milstein 英国和阿根廷国籍 发表了一篇文章 Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity 本站论坛可找到全文 ,这篇文章第一次阐述了单克隆抗体的制备 抗绵羊红细胞单克隆抗体 ，30多年过去了，这两位伟大的科学家发明的单抗制备方法在全世界范围内仍然广泛地应用着，两人于1984年与另一位科学家获得诺贝尔生理学和医学奖，他们的贡献是如此伟大，本人觉得就算给他们发三次诺奖也不为过，遗憾的是Georges J. F. Kölhler比较不幸，48岁时死于实验室火灾事故，这里也提醒各位读者注意实验室安全. 同多抗相比，单抗有如下优势 特异性好、重复性高、均一性强、应用更加广泛，但是与此同时，单抗制备流程长，首次制备成本高 重复制备成本低 、对技术要求也更高。
抗原制备 -- www.immuexp.com中国免疫学实验网
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基础免疫学实验，尽在中国免疫学实验网 http:/ www.immuexp.com. 推荐大家去Proteintech Group公司网站上看看 www.ptgcn.com. 值得注意的是，根据前面说的，如果分子太小是很难引起机体发生免疫反应的，所以合成好多肽后还需要将多肽连在一个大的载体上以增加其免疫原性，常用的载体有 BSA 牛血清白蛋白 ,RSA(兔血清白蛋白),HSA 人血清白蛋白 ，OVA 卵清蛋白 ，GST 谷胱甘肽S转移酶 ，KLH Knoweyhole Limpet Hemocyanin，钥孔戚血蓝蛋白 ，MAP 多价抗原肽，主要指多聚Lys。 这个网站包含了常见的小分子结构与性质 http:/ www.imtech.res.in/raghava/haptendb/. 另外还推荐一本书 李俊锁主编的 兽药残留分析 ，上海科学技术出版社出版。
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